注意事項質粒質量:請務必使用高質量轉染級無內質粒(推薦使用QIAGEN或者MN公司去內質粒提取試劑盒)。通過260nm光吸收測定DNA濃度,260nm/280nm比值確定DNA純度(比值應該在1.8~2.0的范圍之內)。如有可能,請通過瓊脂糖凝膠電泳檢測質粒的完整性。細胞條件:使用適當保存和經常傳代的健康細胞。確保培養基沒有被細菌、或支原體污染。如果細胞是近期復蘇的液氮凍存細胞,請在轉染前至少傳代兩次。建議使用GIBCO或者78bio公司血清培養細胞。更多Polysciences PEI轉染試劑等相關產品信息,歡迎咨詢上海曼博生物!近期還有PEI試用裝申請活動,可關注我們的公眾號:Mine-b...
產品特點:PEIMAX40K是線性聚乙烯亞胺鹽酸鹽形式(LinearPolyethylenimineHydrochloride),是線性化聚乙烯亞胺PEI25K的升級產品。相比于PEI25K,PEIMAX40K:1.完全水解(去乙酰化);2.鹽酸鹽形式,具更高的水溶特性;3.含更長連續性乙烯亞胺片段,其質子化氮水平比PEI25K提高11%以上。應用領域:PEIMAX40K(cat#24765)是一款非GMP等級的PEI轉染試劑,適用于基礎學術研究和藥物研發早期階段,以固體粉末形式提供,需用戶自行配置(詳情見使用方法)。也歡迎關注我們的公眾號:Mine-bio,查看更多詳情信息!用PEI轉染時,...
上海曼博生物醫藥科技有限公司始終致力于為客戶提供一站式生物醫藥科技服務,以創新和為價值理念,通過自身研發團隊,以及與國內外專業科研團隊強強聯合,不斷創新,為生命科學和醫藥研發行業提供產品和服務。生物醫學工程是綜合應用生命科學與工程科學的原理和方法,從工程學角度在分子、細胞、組織、乃至整個人體系統多層次認識人體的結構、功能和其他生命現象,研究用于防病、治病、人體功能輔助及衛生保健的人工材料、制品、裝置和系統技術的總稱。也歡迎關注我們的公眾號:Mine-bio,查看更多技術文章!PEI轉染試劑是粉末的還是液體的?25KPEI轉染試劑蛋白產量對于某些類型的細胞如HEK-293、HEK293T、NIH...
穩定轉染方法:1.接種細胞:轉染前一晚,用膠原酶(WORTHINGTONG公司LS004196)消化細胞并計數(不建議用胰酶)。調整細胞濃度,將細胞鋪入細胞培養的器皿,每個孔置入的細胞量應能使轉染時細胞匯合度達到70~80%。2.準備DNA-PEI復合物:DNA、PEI試劑和稀釋劑在進行以下步驟前需先使其升至室溫。依據表1所示,用Opti-MEMITM(Invitrogen)或其他適合的無蛋白培養基稀釋適量DNA。用同樣的培養基稀釋PEI試劑。每1μgDNA需用1.5-5μL線性PEI轉染試劑(這個需要客戶自行摸索配比,每一批轉染試劑和每一批DNA比例可能會稍有不同)。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶...
瞬時轉染方法1.接種細胞:轉染前,用膠原酶消化細胞并計數(不建議用胰酶)。調整細胞濃度,將細胞鋪入細胞培養的器皿,總體積如表1所示,每個孔置入的細胞量應能使轉染時細胞匯合度達到70~80%。2.準備DNA-PEI復合物:DNA、PEI試劑和稀釋劑在進行以下步驟前需先使其升至室溫。依據表1所示,用Opti-MEMITM(Invitrogen)或其他適合的無蛋白培養基稀釋適量DNA。用同樣的培養基稀釋PEI試劑。每1μgDNA需用2-5μL線性PEI轉染試劑。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶液的試管,一邊將稀釋的線性PEI轉染試劑滴加至試管中(注意:請勿顛倒添加順序)。充分混勻后,室溫靜置10~25min...
PEIMAX——高產工業化轉染試劑-高度濃縮,可制備大量轉染試劑Polysciences轉染試劑系列是基于聚乙烯亞胺(Polyethylenimine,PEI)的產品,因其較高的轉染效果,已廣泛應用于工業化生產。聚乙烯亞胺是一種具有較高的陽離子電荷密度的有機大分子,每相隔二個碳原子,即每“第三個原子都是質子化的氨基氮原子,使得聚合物網絡在任何pH下都能充當有效的“質子海綿”(protonsponge)體。PEI可用作轉染試劑,它可以縮聚DNA分子形成顆粒并轉染真核細胞。PEIMAX40K是由Polysciences出品的全合成線性聚乙烯亞胺瞬時轉染試劑。PEIMAX是一款高度濃縮的粉劑,大量科...
瞬時轉染方法:1.接種細胞:轉染前一晚,用膠原酶(WORTHINGTONG公司LS004196)消化細胞并計數(不建議用胰酶)。調整細胞濃度,將細胞鋪入細胞培養的器皿,每個孔置入的細胞量應能使轉染時細胞匯合度達到70~80%。2.準備DNA-PEI復合物:DNA、PEI試劑和稀釋劑在進行以下步驟前需先使其升至室溫。,用Opti-MEMITM(Invitrogen)或其他適合的無蛋白培養基稀釋適量DNA。用同樣的培養基稀釋PEI試劑。每1μgDNA需用1.5-5μL線性PEI轉染試劑。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶液的試管,一邊將稀釋的線性PEI轉染試劑滴加至試管中(注意:請勿顛倒添加順序)。充分混勻...
對于某些類型的細胞如HEK-293、HEK293T、NIH/3T3和COS細胞,在轉染前兩天鋪板可顯著提高轉入基因的表達水平。如果選擇轉染前兩天鋪板,可適當降低鋪板密度,以確保轉染時細胞的匯合度仍為70~80%。2.對于接觸抑制敏感的細胞,可適當降低鋪板密度。3.即使在有蛋白(如10%的血清)存在的情況下,DNA-PEI復合物仍能轉染細胞,但是DNA-PEI復合物必須在無蛋白存在的條件下形成。我們推薦使用Opti-MEMITM培養基以達到*轉染效率。其他的無蛋白培養基則需測試與線性PEI轉染試劑的兼容性。更多關于PEI轉染試劑相關產品技術問題,歡迎咨詢上海曼博生物!也歡迎關注我們的公眾號:Mi...
產品簡介Transporter5轉染試劑是一種非GMP等級的即用型線性聚乙烯亞胺(PEI轉染試劑)溶液,由PEIMAX配置而成,采用0.1umPES無菌過濾器,完全消除支原體污染風險。Transporter5將DNA縮聚成帶正電荷的復合物,這些復合物很容易通過內吞作用進入細胞,并且Transporter5-DNA復合物能很好地抵御溶酶體的降解作用,有效提高轉染效率。適用于工藝開發、臨床前和早期臨床研究,可無縫過渡到MAXgeneGMP用于商業化生產。Transporter5轉染試劑能高效地將DNA轉染入HEK-293、CHO、COS、HELA、昆蟲(SF9、SF21)等真核細胞系,可作用于大到...
對于某些類型的細胞如HEK-293、HEK293T、NIH/3T3和COS細胞,在轉染前兩天鋪板可顯著提高轉入基因的表達水平。如果選擇轉染前兩天鋪板,可適當降低鋪板密度,以確保轉染時細胞的匯合度仍為70~80%。2.對于接觸抑制敏感的細胞,可適當降低鋪板密度。3.即使在有蛋白(如10%的血清)存在的情況下,DNA-PEI復合物仍能轉染細胞,但是DNA-PEI復合物必須在無蛋白存在的條件下形成。我們推薦使用Opti-MEMITM培養基以達到*轉染效率。其他的無蛋白培養基則需測試與線性PEI轉染試劑的兼容性。更多Polysciences PEI轉染試劑等相關產品信息,歡迎咨詢上海曼博生物!如想申請...
對于某些類型的細胞如HEK-293、HEK293T、NIH/3T3和COS細胞,在轉染前兩天鋪板可顯著提高轉入基因的表達水平。如果選擇轉染前兩天鋪板,可適當降低鋪板密度,以確保轉染時細胞的匯合度仍為70~80%。2.對于接觸抑制敏感的細胞,可適當降低鋪板密度。3.即使在有蛋白(如10%的血清)存在的情況下,DNA-PEI復合物仍能轉染細胞,但是DNA-PEI復合物必須在無蛋白存在的條件下形成。我們推薦使用Opti-MEMITM培養基以達到*轉染效率。其他的無蛋白培養基則需測試與線性PEI轉染試劑的兼容性。4.對大多數細胞來而言,每1μgDNA使用3.0μLEndoFectinTM試劑都能獲得較...
產品簡介:Polysciences轉染試劑系列是基于聚乙烯亞胺(Polyethylenimine,PEI)的產品,因其較高的轉染效果,已廣泛應用于工業化生產。聚乙烯亞胺是一種具有較高的陽離子電荷密度的有機大分子,每相隔二個碳原子,即每“第三個原子都是質子化的氨基氮原子,使得聚合物網絡在任何pH下都能充當有效的“質子海綿”體(protonsponge)。PEI可用作轉染試劑,它可以縮聚DNA分子形成顆粒并轉染真核細胞。有實驗證明,分子量為25000的線性PEI即Polysciences23966(PEI25K)轉染效率表現優良。產品特點:適用于生產mABs、rAbs、bsABs和病毒載體(AVV...
瞬時轉染方法:1.接種細胞:轉染前一晚,用膠原酶(WORTHINGTONG公司LS004196)消化細胞并計數(不建議用胰酶)。調整細胞濃度,將細胞鋪入細胞培養的器皿,每個孔置入的細胞量應能使轉染時細胞匯合度達到70~80%。2.準備DNA-PEI復合物:DNA、PEI試劑和稀釋劑在進行以下步驟前需先使其升至室溫。,用Opti-MEMITM(Invitrogen)或其他適合的無蛋白培養基稀釋適量DNA。用同樣的培養基稀釋PEI試劑。每1μgDNA需用1.5-5μL線性PEI轉染試劑。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶液的試管,一邊將稀釋的線性PEI轉染試劑滴加至試管中(注意:請勿顛倒添加順序)。充分混勻...
穩定轉染方法:1.接種細胞:轉染前一晚,用膠原酶(WORTHINGTONG公司LS004196)消化細胞并計數(不建議用胰酶)。調整細胞濃度,將細胞鋪入細胞培養的器皿,每個孔置入的細胞量應能使轉染時細胞匯合度達到70~80%。2.準備DNA-PEI復合物:DNA、PEI試劑和稀釋劑在進行以下步驟前需先使其升至室溫。依據表1所示,用Opti-MEMITM(Invitrogen)或其他適合的無蛋白培養基稀釋適量DNA。用同樣的培養基稀釋PEI試劑。每1μgDNA需用1.5-5μL線性PEI轉染試劑(這個需要客戶自行摸索配比,每一批轉染試劑和每一批DNA比例可能會稍有不同)。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶...
產品簡介Transporter5轉染試劑是一種非GMP等級的即用型線性聚乙烯亞胺(PEI轉染試劑)溶液,由PEIMAX配置而成,采用0.1umPES無菌過濾器,完全消除支原體污染風險。Transporter5將DNA縮聚成帶正電荷的復合物,這些復合物很容易通過內吞作用進入細胞,并且Transporter5-DNA復合物能很好地抵御溶酶體的降解作用,有效提高轉染效率。適用于工藝開發、臨床前和早期臨床研究,可無縫過渡到MAXgeneGMP用于商業化生產。Transporter5轉染試劑能高效地將DNA轉染入HEK-293、CHO、COS、HELA、昆蟲(SF9、SF21)等真核細胞系,可作用于大到...
產品簡介:Polysciences轉染試劑系列是基于聚乙烯亞胺(Polyethylenimine,PEI)的產品,因其較高的轉染效果,已廣泛應用于工業化生產。聚乙烯亞胺是一種具有較高的陽離子電荷密度的有機大分子,每相隔二個碳原子,即每“第三個原子都是質子化的氨基氮原子,使得聚合物網絡在任何pH下都能充當有效的“質子海綿”體(protonsponge)。PEI可用作轉染試劑,它可以縮聚DNA分子形成顆粒并轉染真核細胞。有實驗證明,分子量為25000的線性PEI即Polysciences23966(PEI25K)轉染效率表現優良。產品特點:適用于生產mABs、rAbs、bsABs和病毒載體(AVV...
1.對于某些類型的細胞如HEK-293、HEK293T、NIH/3T3和COS細胞,在轉染前兩天鋪板可顯著提高轉入基因的表達水平。如果選擇轉染前兩天鋪板,可適當降低鋪板密度,以確保轉染時細胞的匯合度仍為70~80%。2.對于接觸抑制敏感的細胞,可適當降低鋪板密度。3.即使在有蛋白(如10%的血清)存在的情況下,DNA-PEI復合物仍能轉染細胞,但是DNA-PEI復合物必須在無蛋白存在的條件下形成。我們推薦使用Opti-MEMITM培養基以達到*轉染效率。其他的無蛋白培養基則需測試與線性PEI轉染試劑的兼容性。4.對大多數細胞來而言,每1μgDNA使用3.0μLEndoFectinTM試劑都能獲...
對于某些類型的細胞如HEK-293、HEK293T、NIH/3T3和COS細胞,在轉染前兩天鋪板可顯著提高轉入基因的表達水平。如果選擇轉染前兩天鋪板,可適當降低鋪板密度,以確保轉染時細胞的匯合度仍為70~80%。2.對于接觸抑制敏感的細胞,可適當降低鋪板密度。3.即使在有蛋白(如10%的血清)存在的情況下,DNA-PEI復合物仍能轉染細胞,但是DNA-PEI復合物必須在無蛋白存在的條件下形成。我們推薦使用Opti-MEMITM培養基以達到*轉染效率。其他的無蛋白培養基則需測試與線性PEI轉染試劑的兼容性。更多關于PEI轉染試劑相關產品技術問題,歡迎咨詢上海曼博生物!也歡迎關注我們的公眾號:Mi...
穩定轉染方法:1.接種細胞:轉染前一晚,用膠原酶(WORTHINGTONG公司LS004196)消化細胞并計數(不建議用胰酶)。調整細胞濃度,將細胞鋪入細胞培養的器皿,每個孔置入的細胞量應能使轉染時細胞匯合度達到70~80%。2.準備DNA-PEI復合物:DNA、PEI試劑和稀釋劑在進行以下步驟前需先使其升至室溫。依據表1所示,用Opti-MEMITM(Invitrogen)或其他適合的無蛋白培養基稀釋適量DNA。用同樣的培養基稀釋PEI試劑。每1μgDNA需用1.5-5μL線性PEI轉染試劑(這個需要客戶自行摸索配比,每一批轉染試劑和每一批DNA比例可能會稍有不同)。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶...
材料:質粒DNA指數生長的真核細胞PEI(聚乙烯亞胺)1×HBS(pH7.4)配方:PEI儲存液(100μM):稱取125mgPEI粉末溶解于50ml1×HBS(pH7.4)中,0.2μm濾膜過濾,儲存于4℃備用。1×HBS(pH7.4):將8.76gNaCl溶解于900ml超純水,加入20ml1M的HEPES,調pH值到7.4,定容至1L,過濾(0.2μm濾膜)后儲存于4℃備用。方法:1.細胞分盤:通過胰酶消化收集細胞,用適當的完全培養基以4×105至8×105細胞/cm2的密度平鋪細胞于60mm組織培養皿上(根據實驗需要選擇培養皿,使細胞貼壁后所占總面積達到培養皿面積的70-90%)。根據...
產品簡介:Polysciences轉染試劑系列是基于聚乙烯亞胺(Polyethylenimine,PEI)的產品,因其較高的轉染效果,已廣泛應用于工業化生產。聚乙烯亞胺是一種具有較高的陽離子電荷密度的有機大分子,每相隔二個碳原子,即每“第三個原子都是質子化的氨基氮原子,使得聚合物網絡在任何pH下都能充當有效的“質子海綿”體(protonsponge)。PEI可用作轉染試劑,它可以縮聚DNA分子形成顆粒并轉染真核細胞。有實驗證明,分子量為25000的線性PEI即Polysciences23966(PEI25K)轉染效率表現優良。產品特點:適用于生產mABs、rAbs、bsABs和病毒載體(AVV...
對于某些類型的細胞如HEK-293、HEK293T、NIH/3T3和COS細胞,在轉染前兩天鋪板可顯著提高轉入基因的表達水平。如果選擇轉染前兩天鋪板,可適當降低鋪板密度,以確保轉染時細胞的匯合度仍為70~80%。2.對于接觸抑制敏感的細胞,可適當降低鋪板密度。3.即使在有蛋白(如10%的血清)存在的情況下,DNA-PEI復合物仍能轉染細胞,但是DNA-PEI復合物必須在無蛋白存在的條件下形成。我們推薦使用Opti-MEMITM培養基以達到*轉染效率。其他的無蛋白培養基則需測試與線性PEI轉染試劑的兼容性。4.對大多數細胞來而言,每1μgDNA使用3.0μLEndoFectinTM試劑都能獲得較...
化學轉染方法是生物醫學研究中常用的轉染方法,主要包括兩類:陽離子脂質體和陽離子聚合物。其基本原理是利用陽離子的化學分子與帶有負電荷的核酸通過正負電荷作用形成穩定的復合物。一方面使復合體整體帶上正電荷(多數細胞膜表面帶有弱的負電荷,通過電荷作用吸引復合體到細胞膜表面);另一方面對線性的核酸進行濃縮,使其體積變小更易穿透細胞膜。陽離子聚合物類轉染試劑可以說是貧窮實驗室的福音了。早在2012年就有研究小組在大名鼎鼎的Nature Protocol上發表了PEI作為轉染試劑的詳細方法,到現在被越來越多的實驗室采用。PEI轉染試劑的工作原理是什么?無動物源成分PEI轉染試劑作用原理材料:質粒DNA指數生...
PEI在于可以應用于體內試驗。當初試驗經費很有限,被逼無奈只能放棄脂質體2000,選擇PEI,以至于相當長的時間內,轉染試驗都不順利。下面是幾點關于PEI轉染的注意要點:1.PEI的使用量可以參照脂質體2000的說明書,所用質粒盡量去內2.轉染時,一定要把PEI+DMEM加入到質粒+DMEM中,順序不可錯,輕微混勻,靜止20min3.轉染后4小時,一定要換液!換含有FBS的完全培養液!因為PEI對細胞毒性太大4.如果后續試驗涉及到穩定篩選,建議把血清濃度適當提高。PS:事實證明,PEI是可行的,已經做出穩定細胞系了。更多關于PEI轉染試劑相關的信息,可咨詢上海曼博生物醫藥科技有限公司!歡迎關注...
注意事項質粒質量:請務必使用高質量轉染級無內質粒(推薦使用QIAGEN或者MN公司去內質粒提取試劑盒)。通過260nm光吸收測定DNA濃度,260nm/280nm比值確定DNA純度(比值應該在1.8~2.0的范圍之內)。如有可能,請通過瓊脂糖凝膠電泳檢測質粒的完整性。細胞條件:使用適當保存和經常傳代的健康細胞。確保培養基沒有被細菌、或支原體污染。如果細胞是近期復蘇的液氮凍存細胞,請在轉染前至少傳代兩次。建議使用GIBCO或者78bio公司血清培養細胞。近期還有PEIfree申請活動,歡迎咨詢上海曼博生物!歡迎關注我們的公眾號:Mine-bio,回復關鍵詞“申請PEI”,即可參加活動!更多關于P...
瞬時轉染方法1.接種細胞:轉染前,用膠原酶消化細胞并計數(不建議用胰酶)。調整細胞濃度,將細胞鋪入細胞培養的器皿,總體積如表1所示,每個孔置入的細胞量應能使轉染時細胞匯合度達到70~80%。2.準備DNA-PEI復合物:DNA、PEI試劑和稀釋劑在進行以下步驟前需先使其升至室溫。依據表1所示,用Opti-MEMITM(Invitrogen)或其他適合的無蛋白培養基稀釋適量DNA。用同樣的培養基稀釋PEI試劑。每1μgDNA需用2-5μL線性PEI轉染試劑。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶液的試管,一邊將稀釋的線性PEI轉染試劑滴加至試管中(注意:請勿顛倒添加順序)。充分混勻后,室溫靜置10~25min...
對于某些類型的細胞如HEK-293、HEK293T、NIH/3T3和COS細胞,在轉染前兩天鋪板可顯著提高轉入基因的表達水平。如果選擇轉染前兩天鋪板,可適當降低鋪板密度,以確保轉染時細胞的匯合度仍為70~80%。2.對于接觸抑制敏感的細胞,可適當降低鋪板密度。3.即使在有蛋白(如10%的血清)存在的情況下,DNA-PEI復合物仍能轉染細胞,但是DNA-PEI復合物必須在無蛋白存在的條件下形成。我們推薦使用Opti-MEMITM培養基以達到*轉染效率。其他的無蛋白培養基則需測試與線性PEI轉染試劑的兼容性。Polysciences 是一家化學品制造公司,產品廣泛應用于各個科研領域。公司成立于19...
對于某些類型的細胞如HEK-293、HEK293T、NIH/3T3和COS細胞,在轉染前兩天鋪板可顯著提高轉入基因的表達水平。如果選擇轉染前兩天鋪板,可適當降低鋪板密度,以確保轉染時細胞的匯合度仍為70~80%。2.對于接觸抑制敏感的細胞,可適當降低鋪板密度。3.即使在有蛋白(如10%的血清)存在的情況下,DNA-PEI復合物仍能轉染細胞,但是DNA-PEI復合物必須在無蛋白存在的條件下形成。我們推薦使用Opti-MEMITM培養基以達到*轉染效率。其他的無蛋白培養基則需測試與線性PEI轉染試劑的兼容性。更多Polysciences PEI轉染試劑等相關產品信息,歡迎咨詢上海曼博生物!如想申請...
對于某些類型的細胞如HEK-293、HEK293T、NIH/3T3和COS細胞,在轉染前兩天鋪板可顯著提高轉入基因的表達水平。如果選擇轉染前兩天鋪板,可適當降低鋪板密度,以確保轉染時細胞的匯合度仍為70~80%。2.對于接觸抑制敏感的細胞,可適當降低鋪板密度。3.即使在有蛋白(如10%的血清)存在的情況下,DNA-PEI復合物仍能轉染細胞,但是DNA-PEI復合物必須在無蛋白存在的條件下形成。我們推薦使用Opti-MEMITM培養基以達到*轉染效率。其他的無蛋白培養基則需測試與線性PEI轉染試劑的兼容性。更多關于PEI轉染試劑相關產品技術問題,歡迎咨詢上海曼博生物!也歡迎關注我們的公眾號:Mi...
細胞分盤:通過胰酶消化收集細胞,用適當的完全培養基以4×105至8×105細胞/cm2的密度平鋪細胞于60mm組織培養皿上(根據實驗需要選擇培養皿,使細胞貼壁后所占總面積達到培養皿面積的70-90%)。根據細胞貼壁情況于含5%CO2的37℃溫箱中孵育8-24h,當細胞貼壁完全后即可開始轉染。轉染前換入2mL預熱的無血清培養基。2、制備PEI-DNA混合物:以60mm組織培養皿用420μL反應總體積為例。準備兩支1.5mL離心管,一管將質粒DNA(總量2-8μg為佳)加入240μLHBS中,混勻。另一管中則用HBS將100μM的PEI儲存液稀釋成10μM,充分混合。然后取180μL10μMPEI...