外泌體是細胞分泌到胞外的一種囊泡,其大小為30-150nm,具有雙層膜結構和茶托狀形態,含有豐富的內含物(包括核酸、蛋白和脂質等),參與細胞間的分子傳遞。外泌體普遍存在于細胞培養上清以及各種體液中,包括血液、唾液、尿液、乳汁等,同時也存在于組織樣本中,如腦組織...
透射電子顯微鏡(TEM)和掃描電子顯微鏡(SEM)是用于評估外泌體形態、大小和表型的的兩種常見的電子顯微鏡。SEM和TEM均使用電子束產生高分辨率的亞微米顆粒放大圖像,以區分外泌體與殘留在樣品中相似大小的非外泌體顆粒,該方法還可用于檢查樣品的純度。TEM與SE...
磁珠免疫法分離外泌體:將針對目的抗原的抗體通過生物素-鏈霉親和素連接到磁珠表面,然后將磁珠與樣品共孵育,使外泌體特異性結合到磁珠上形成磁珠-外泌體復合物,再用蒸餾水或者PBS沖洗,結尾用甘氨酸-Tris-HCl溶液洗脫獲得外泌體。該方法相對于ELISA的好處主...
外泌體分離的主要挑戰之一是消除納米級污染物,包括干擾外泌體標志物解析的游離核酸和脂蛋白。超速離心是目前分離外泌體的主要技術。盡管如此,它仍難以符合臨床應用所需的標準,主要是由于該方法得到的外泌體純度不足,產量較低,完整性欠佳且分離純化操作耗時長。其他方法,例如...
外泌體的相關成分:1、外泌體的膜同細胞一樣,是磷脂雙分子層。2、外泌體膜含有MHC-1/2蛋白,能綁定特異性的肽鏈。3、外泌體膜中有跨膜蛋白PGRL、LAMP1、LAMP2。4、外泌體膜中有膜轉運融合蛋白annexins、RAN、GTPases。5、外泌體膜上...
超速離心是外泌體提取較常用的方法也被認為是金標準,主要是根據外泌體的沉降系數、大小和形狀將其分離出來。首先4℃低速離心(300-500g,10min)去除死細胞以及細胞碎片,隨后以較高離心速度(2000xg,10min)去除生物聚合物以及凋亡小體,然后用100...
外泌體為細胞療法中的不同合成分子和生物分子的遞送提供了廣闊的前景和嶄新的診療領域。外泌體還顯示出了在診療各種疾病(如心肌病和神經病)方面的潛力。但是,在實際應用外泌體之前,需要使用大型動物模型進行進一步研究和臨床試驗。同時需要開發大規模生產質量可控的外泌體并快...
外泌體的來源與特征:外泌體是一種存在于細胞外的多囊泡體,通過細胞內吞泡膜向內凹陷形成,其大小均一,直徑為40-100nm,密度為1.10-1.18g/mL。外泌體可由間充質干細胞、淋巴細胞和肉瘤細胞等多種類型細胞主動分泌釋放。外泌體內主要含有核酸、蛋白質和脂質...
外泌體的臨床應用:間充質干細胞是目前較普遍使用的細胞類型,它具有自我更新,多向分化、分泌細胞因子和細胞外囊泡體、免疫調節、來源普遍等特點,在流感病毒的臨床診療中取得了良好的成果。間充質干細胞來源外泌體與間充質干細胞有著相似的功能,包括修復與再生組織、阻止炎癥反...
外泌體為細胞療法中的不同合成分子和生物分子的遞送提供了廣闊的前景和嶄新的診療領域。外泌體還顯示出了在診療各種疾病(如心肌病和神經病)方面的潛力。但是,在實際應用外泌體之前,需要使用大型動物模型進行進一步研究和臨床試驗。同時需要開發大規模生產質量可控的外泌體并快...
外泌體遞送藥物的優勢:許多新的候選藥物(例如蛋白質和核酸)在體內環境中高度不穩定,對診療結果的效果提出了重大挑戰。鑒于與許多當前的納米微粒遞送系統相關的問題,外泌體作為“自然的遞送系統”允許遞送這些生物分子。由于外泌體體積小和其本身就是細胞產物,通過外泌體遞送...
外泌體的提取分離方法:1、超速離心法(差速離心):超離法是較常用的外泌體純化手段,采用低速離心、高速離心交替進行,可分離到大小相近的囊泡顆粒。超離法因操作簡單,獲得的囊泡數量較多而廣受歡迎,但過程比較費時,且回收率不穩定(可能與轉子類型有關),純度也受到質疑;...
近年來,外泌體的捕獲技術越來越多,微流體系也被用于外泌體提取,此方法能根據其物理和生化特性同時分離外泌體。采用這種方法獲得的樣品純度高,且可及時獲取外泌體用于疾病的相關檢測。在初次注射時外泌體粘附在微流控設備的內表面,并在隨后的PBS注射中沖洗掉。此方法采用的...
外泌體與免疫反應、病毒致病性、妊娠、心血管疾病、中樞的神經系統相關疾病和病癥進展相關。由外泌體傳遞到受體細胞的蛋白質、代謝物和核酸有效地改變了它們的生物反應。這種外泌體介導的反應可以促進或阻止疾病。外泌體在調節復雜的細胞內通路方面的固有特性使其在許多疾病的診療...
透射電子顯微鏡(TEM)和掃描電子顯微鏡(SEM)是用于評估外泌體形態、大小和表型的的兩種常見的電子顯微鏡。SEM和TEM均使用電子束產生高分辨率的亞微米顆粒放大圖像,以區分外泌體與殘留在樣品中相似大小的非外泌體顆粒,該方法還可用于檢查樣品的純度。TEM與SE...
細胞外囊泡是蛋白質、mRNA、miRNA和脂質運輸來完成細胞間通訊通路的重要媒介,根據它們的大小和發生分為三類,包括外泌體、微泡和凋亡小體。其中,外泌體是直徑大約為40-100nm的包裝囊泡,由多種細胞分泌,內含有特定的蛋白質、脂質、細胞因子或遺傳物質。來源于...
外泌體生物學功能:1、在心血管系統中,據報道,源自人胚胎干細胞(ESC)的間充質干細胞(MSC)外泌體可減少小鼠和豬模型中的心肌缺血和再灌注損傷;2、在免疫系統中,據報道趨化因子受體CCR5通過外泌體在細胞之間轉移是細胞人類免疫缺陷病毒傳染的一種機制;3、在中...
人體內多種細胞及體液均可分泌外泌體,包括內皮細胞、免疫細胞、血小板、平滑肌細胞等。當其由宿主細胞被分泌到受體細胞中時,外泌體可通過其攜帶的蛋白質、核酸、脂類等來調節受體細胞的生物學活性。外泌體介導的細胞間通訊主要通過以下三種方式:一是外泌體膜蛋白可以與靶細胞膜...
被特定部位的細胞獲取的瘤子外泌體可為腫細胞的轉移準備轉移前微環境。用肺轉傾向的腫細胞細胞來源的外泌體處理小鼠后可使骨轉傾向的腫細胞細胞重新定向。外泌體的蛋白質組學分析發現不同部位傾向性的腫細胞細胞來源的外泌體具有不同的整合素(integrin)表達譜,整合素α...
外泌體的生物發生和鑒定。液體和細胞外成分,如蛋白質、脂類、代謝物、小分子和離子,可以通過內吞作用和質膜內陷,與細胞表面蛋白一起進入細胞。由此產生的胞腔側質膜芽的形成表現為質膜的外-內取向。這一出芽過程導致芽的形成可能與內質網、跨高爾基網絡(TGN)和線粒體預先...
外泌體的提取分離的方法:1、超速離心法(差速離心):超離法是較常用的外泌體純化手段,采用低速離心、高速離心交替進行,可分離到大小相近的囊泡顆粒。超離法因操作簡單,獲得的囊泡數量較多而廣受歡迎,但過程比較費時,且回收率不穩定(可能與轉子類型有關),純度也受到質疑...
PEG沉淀法分離外泌體:通常通過將無水聚合物,如聚乙二醇(PEG),與樣品混合來沉淀外泌體。PEG聚合物競爭性結合水分子,增加疏水性蛋白和脂質分子的相互結合力從而沉淀外泌體,然后通過離心分離外泌體。這種分離的方法快速,簡便,可用于各種起始體積(從100μL到幾...
細胞外小泡通過充當脂肪組織、肝臟、骨骼肌和免疫細胞之間的細胞間通訊方式,在肥胖及其代謝并發癥的發展中發揮作用。外泌體可能在外周胰島素敏感性的調節中起作用,外周胰島素敏感性是T2D發病機理的主要組成部分。外泌體似乎通過至少兩種不同的機制來調節胰島素敏感性,即通過...
外泌體的臨床應用:間充質干細胞是目前較普遍使用的細胞類型,它具有自我更新,多向分化、分泌細胞因子和細胞外囊泡體、免疫調節、來源普遍等特點,在流感病毒的臨床診療中取得了良好的成果。間充質干細胞來源外泌體與間充質干細胞有著相似的功能,包括修復與再生組織、阻止炎癥反...
密度梯度離心法根據在蔗糖、碘海醇或碘克沙醇等惰性溶液中的浮力密度將外泌體分成特定的層,目前普遍應用的是蔗糖,這種方法可以成功地將亞細胞成分(例如過氧化物酶體,線粒體和核內體)分離到密度梯度溶液中的不同層中。樣品被放置在梯度的頂部,當施加離心力時,樣品中的顆粒以...
肉瘤細胞可以通過產生異常的抗肉瘤或肉瘤免疫應答并促進瘤子細胞的活動而大量產生外泌體,這些外泌體富含促病的細胞成分,例如PD-L1、mRNA和micro-RNA等免疫阻止蛋白,參與病癥的發展、轉移和耐藥性。值得注意的是,肉瘤分泌的外泌體表面和外泌體顆粒中均存在的...
外泌體遞送藥物的優勢:許多新的候選藥物(例如蛋白質和核酸)在體內環境中高度不穩定,對診療結果的效果提出了重大挑戰。鑒于與許多當前的納米微粒遞送系統相關的問題,外泌體作為“自然的遞送系統”允許遞送這些生物分子。由于外泌體體積小和其本身就是細胞產物,通過外泌體遞送...
Exosome,中文名外泌體,是一種能被大多數細胞分泌的微小膜泡,具有脂質雙層膜結構,直徑大約40-100nm。盡管外泌體較初在1983年就被發現,但人們一直認為它只是一種細胞的廢棄物。然而較近幾年,人們發現這種微小膜泡中含有細胞特異的蛋白、脂質和核酸,能作為...
外泌體是分泌的細胞外囊泡的主要群體,是具有生物活性的脂雙層囊泡,大小約為30-100nm,由不同類型的正常細胞和瘤子細胞自然產生和釋放。這些囊泡在細胞間通訊中起重要作用,并影響細胞外環境和免疫系統反應。外泌體通過內體途徑分泌到細胞外空間,并將各種生物活性分子(...
外泌體病毒傳染:外泌體可以限制或促進病毒傳染。如IFNα或APOBEC3G等外泌體載體可通過限制病毒復制或增強抗病毒免疫來阻止傳染。病毒也可以劫持外泌體的生物發生機制來促進病毒的傳播。外泌體可以作為一個假包膜,通過四聚體蛋白(CD81,CD9)和PtSer相互...