常用的病毒載體有腺病毒、逆轉(zhuǎn)錄病毒和慢病毒。逆轉(zhuǎn)錄病毒載體只能感ran分裂期細胞,而且容量有限,腺病毒一般不能整合到染色體上,只能進行瞬時感ran。與其它逆轉(zhuǎn)錄病毒相比,慢病毒(LV)具有可以感ran非分裂期細胞、容納外源性基因片段大,可以長期表達等xian zhu優(yōu)點。慢病毒不產(chǎn)生任何有效的細胞免疫應答,可作為一種體外基因運輸?shù)墓ぞ摺B《据d體介導的轉(zhuǎn)基因表達能持續(xù)數(shù)月,且無可觀察到的病理學現(xiàn)象。慢病毒包裝系統(tǒng)一般由慢病毒表達載體和慢病毒包裝載體組成。而慢病毒包裝質(zhì)粒可提供所有的轉(zhuǎn)錄并包裝RNA到重組的假病毒載體所需要的所有輔助蛋白。為產(chǎn)生高滴度的病毒顆粒,需要利用表達載體和包裝質(zhì)粒同時共轉(zhuǎn)染細胞,在細胞中進行病毒的包裝,包裝好的假病毒顆粒分泌到細胞外的培養(yǎng)基中,離心取得上清液后,可以直接用于宿主細胞的感ran。慢病毒包裝系統(tǒng)一般都是三質(zhì)粒或四質(zhì)粒包裝系統(tǒng)。其中四質(zhì)粒系統(tǒng)比三質(zhì)粒系統(tǒng)在生物安全性上更好一些,所以應用較多。由于其穩(wěn)定性,GFP可用于細胞家系研究中的譜系跟zong。甲基紅試劑盒
就eGFP而言,相對于GFP,其熒光強度更強、熒光性質(zhì)更穩(wěn)定。mCherry是從DsRed演化來的性能*好的一個單體紅色熒光蛋白,可以和GFP系列熒光蛋白共用,實現(xiàn)多色標記。熒光蛋白活性和被融合的目標蛋白功能相互沒有明顯影響。這些熒光標簽蛋白,其融合表達目的蛋白后具有以下優(yōu)點:1.不用破碎組織細胞和不加任何底物,直接通過熒光顯微鏡就能在活細胞中發(fā)出綠色熒光,實時顯示目的基因的表達情況,而且熒光性質(zhì)穩(wěn)定,被譽為活細胞探針。2.其自發(fā)熒光,不需用目的基因的抗體或原位雜交技術(shù)就可推知目的基因在細胞中的定位等情況。3.同時細胞內(nèi)的其它產(chǎn)物不會干擾標簽蛋白檢測,從而使其檢測更顯得快速、簡便、靈敏度高而且重現(xiàn)性。4.其低消耗、高靈敏度檢測,十分適用于高通量的藥物篩選。因此現(xiàn)eGFP表達標簽被廣fan地應用于基團表達調(diào)控、轉(zhuǎn)基因功能研究、蛋白在細胞中的功能定位、遷移變化及藥物篩選等方面。5.mCherry紅色熒光蛋白在標記病毒顆粒,研究病毒和宿主細胞之間更有得天獨厚的優(yōu)勢。如用mRFP或mCherry標記HIV病毒顆粒,研究HIV和宿主細胞問的相互作用以及HIV侵染宿主細胞的過程.用mRFP標記慢病毒顆粒,研究慢病毒在小鼠體內(nèi)的復制過程等。葡萄糖測定試劑盒以GFP作為標記的質(zhì)粒可替代抗生su的作用,可以幫助識別哪些細胞成功地轉(zhuǎn)染了質(zhì)粒。
慢病毒表達載體,即通常所說的穿梭載體,包含了包裝、轉(zhuǎn)染、穩(wěn)定整合所需要的遺傳信息。慢病毒包裝質(zhì)粒可提供所有的轉(zhuǎn)錄并包裝RNA到重組的假病毒載體所需要的所有輔助蛋白。為產(chǎn)生高滴度的病毒顆粒,需要利用表達載體和包裝質(zhì)粒同時共轉(zhuǎn)染細胞,在細胞中進行病毒的包裝,包裝好的假病毒顆粒分泌到細胞外的培養(yǎng)基中,離心取得上清液后,可以直接用于宿主細胞的感ran,目的基因進入到宿主細胞之后,經(jīng)過反轉(zhuǎn)錄,整合到基因組,從而高水平的表達效應分子。
ELISPOT法源自ELISA,又突破傳統(tǒng)ELISA法,是定量ELISA技術(shù)的延伸和新的發(fā)展。兩者都是檢測細胞產(chǎn)生的細胞因子或其他可溶性蛋白,它們*大的不同在于:ELISA通過顯色反應,在酶標儀上測定吸光度,與標準曲線比較得出定量的可溶性蛋白總量。ELISPOT通過顯色反應,在細胞分泌這種可溶性蛋白的相應位置上顯現(xiàn)清晰可辨的斑點,可直接通過ELISPOT分析系統(tǒng)對斑點進行計數(shù),從而計算出分泌該蛋白或者細胞因子的細胞的頻率。由于是單細胞水平檢測,需細胞量少, 比ELISA更靈敏。捕獲抗體為高親和力、高特異性、低內(nèi)du素單抗,在研究者以刺激劑激huo細胞時,不會影響活化細胞分泌細胞因子。但該方法對于操作者的技術(shù)要求較高,要保證孔中細胞的均勻性,否則讀板誤差會很大。ELISA開發(fā)試劑盒含有開發(fā)免疫檢測所需的抗體對和基本組分。與單獨購買抗體和蛋白質(zhì)相比它們更加經(jīng)濟實惠。
競爭法也是一種很常用的方法,一起看看:
競爭法(Competitive ELISA)是用樣本中的游離抗體/抗原與固相的酶標抗體/抗原競爭性結(jié)合的分析方法。當游離抗體(或抗原)濃度越高,則能與固定抗原(或抗體)結(jié)合的酶標抗體(或抗原)就越少,后續(xù)顯色就越淺,即與對照相比,顯色越淺,表示檢測樣本中抗體(或抗原)含量越高。
該法特別適合小分子物質(zhì)的檢測也可用于檢測比較不純的樣本,且重復性好,但是檢測的靈敏度和專一性較差。競爭法測抗原常用于檢測小分子抗原及半抗原,這類抗原通常缺乏兩個以上的識別位點,不適用于雙抗夾心法進行測定。該方法在商業(yè)化ELISA試劑盒中被廣fan運用。 堿性磷酸酶染色測定試劑盒經(jīng)過優(yōu)化,可檢測PSC中的堿性磷酸酶。葡糖-6-磷酸 磷酸脫氫酶檢測試劑盒
熒光素酶通過載體構(gòu)建可以研究基因組織的特異性表達;對一些細胞的生長和轉(zhuǎn)移等變化進行實時觀測和評估。甲基紅試劑盒
細胞生物學(cellbiology)是在顯微、亞顯微和分子水平三個層次上,研究細胞的結(jié)構(gòu)、功能和各種生命規(guī)律的一門科學。細胞生物學由cytology發(fā)展而來,Cytology是關(guān)于細胞結(jié)構(gòu)與功能(特別是染色體)的研究。現(xiàn)代細胞生物學從顯微水平,超微水平和分子水平等不同層次研究細胞的結(jié)構(gòu)、功能及生命活動。細胞生物學是一切生命科學的*為重要的基礎學科之一。同時又是生命科學的生長點,反映了生物科學發(fā)展的*新成就。細胞生物學是以細胞為研究對象,從細胞的整體水平、亞顯微水平、分子水平等三個層次,以動態(tài)的觀點,研究細胞和細胞器的結(jié)構(gòu)和功能、細胞的生活史和各種生命活動規(guī)律的學科。細胞生物學是現(xiàn)代sheng命科學的前沿分支學科之一,主要是從細胞的不同結(jié)構(gòu)層次來研究細胞的生命活動的基本規(guī)律。從生命結(jié)構(gòu)層次看,細胞生物學位于分子生物學與發(fā)育生物學之間,同它們相互銜接,互相滲透。甲基紅試劑盒
上海中喬新舟生物科技有限公司
1、原代細胞:ScienCell(中國區(qū)正規(guī)一級代理)人源和動物源各種原代細胞。
2、培養(yǎng)基:原代細胞**低血清、無血清、無異源蛋白無動物成分培養(yǎng)基。
3、細胞培養(yǎng)試劑:胎牛血清、原代細胞轉(zhuǎn)染試劑盒、細胞實驗檢測試劑盒、細胞生長因子、ELISA試劑盒、定量PCR芯片試劑盒、DNA/RNA及細胞裂解物等。
4、細胞系(株):種類豐富(1000余種),已通過STR鑒定;提供細胞株完全培養(yǎng)基。
5、自研產(chǎn)品:支原體檢測/qing除試劑盒、端粒酶檢測試劑盒、人源/動物源ELISA試劑盒等系列產(chǎn)品。
6、技術(shù)服務:綠/紅色熒光蛋白標記、熒光素酶標記、慢bing毒介導基因沉默或過表達及穩(wěn)轉(zhuǎn)株的構(gòu)建,細菌基因敲除、細胞基因敲除、小鼠基因敲除、血管生成功能學實驗。