實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)：建議先做幾個(gè)孔摸索接種細(xì)胞的數(shù)量和加入CCK-8試劑后的培養(yǎng)時(shí)間。有條件的情況下建議采用多通道移液器，可以減少平行孔間的差異。加入CCK-8試劑時(shí)，建議斜貼著培養(yǎng)板壁加，不要插到培養(yǎng)基頁面下加，容易產(chǎn)生氣泡，會干擾OD值讀數(shù)。白細(xì)胞可能需要培養(yǎng)較長時(shí)間。當(dāng)使用標(biāo)準(zhǔn)96孔板時(shí)，貼壁細(xì)胞的*小接種量至少為1,000 個(gè)/孔 (100 μL 培養(yǎng)基)。檢測白細(xì)胞時(shí)的靈敏度相對較低，因此推薦接種量不低于2,500 個(gè)/孔 (100 μL 培養(yǎng)基)。如果要使用24孔板或6孔板實(shí)驗(yàn)，請先計(jì)算每孔相應(yīng)的接種量，并按照每孔培養(yǎng)基總體積的10%加入CCK-8溶液。如果沒有450nm的濾光片，可以使用吸光度在430-490 nm之間的濾光片，但是450nm濾光片的檢測靈敏度*高。如果待測物質(zhì)有氧化性或還原性的話，可在加CCK-8之前更換新鮮培養(yǎng)基，去掉藥物的影響。當(dāng)然藥物影響比較小的情況可以不更換培養(yǎng)基，直接扣除培養(yǎng)基中加入藥物后的空白吸收即可。使用ELISA讀數(shù)器對溶解的甲臜產(chǎn)物進(jìn)行分光光度計(jì)量化。免疫熒光標(biāo)記

隨著病毒生物學(xué)的發(fā)展，種類繁多的病毒載體已越來越成為向各種實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)（如細(xì)胞系、原代細(xì)胞、組織臟器等）轉(zhuǎn)運(yùn)核酸的重要工具。除了在實(shí)驗(yàn)室的組織培養(yǎng)和動物模型生產(chǎn)中發(fā)揮重要作用，它們還被用于zhi 療遺傳性疾病的臨床試驗(yàn)中。目前主流的病毒載體系統(tǒng)主要包括慢病毒（LV）、（γ-）逆轉(zhuǎn)錄病毒（RV）、腺病毒（Ad）和腺相關(guān)病毒（AAV）。我們分述之。慢病毒和逆轉(zhuǎn)錄病毒均屬于逆轉(zhuǎn)錄病毒科。其典型特征為其RNA基因組能逆轉(zhuǎn)錄為cDNA副本，cDNA副本又能穩(wěn)定整合至宿主細(xì)胞基因組中（這就是常說的穩(wěn)轉(zhuǎn)）。逆轉(zhuǎn)錄病毒通常分兩種：簡單的（有時(shí)又稱為致ai病毒或γ-逆轉(zhuǎn)錄病毒，如鼠白血病病毒）和復(fù)雜的（如慢病毒）。這些亞型間主要的差異在于復(fù)雜的逆轉(zhuǎn)錄病毒存在一些附屬基因和調(diào)控基因，而簡單的則沒有（下文有進(jìn)一步的討論）。這兩類病毒顆粒都含有兩份正鏈RNA，RNA上附有病毒反轉(zhuǎn)錄酶（RT），它們位于病毒的內(nèi)核（圖1）。位于內(nèi)核的還有結(jié)構(gòu)蛋白和酶，包括核殼（NC）、衣殼（CA）、整合酶（IN）和蛋白酶（PR）。內(nèi)核由一圈外周蛋白層包圍，外周蛋白包括基質(zhì)蛋白（MA），基質(zhì)蛋白又被來源于宿主細(xì)胞細(xì)胞膜插有包膜糖蛋白的腹膜所包圍。原代內(nèi)皮細(xì)胞分離試劑盒免疫腫/瘤學(xué)試劑盒可檢測可溶性免疫檢查點(diǎn)分子，有助于提供ai癥免疫的全/面信息。

細(xì)胞毒性是由合成化合物、細(xì)胞自然產(chǎn)生毒性或免疫調(diào)節(jié)細(xì)胞(如細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞,自然殺傷細(xì)胞等)引起的細(xì)胞殺傷事件。目前主要通過對受損細(xì)胞釋放的相關(guān)底物(如乳酸脫氫酶-LDH)進(jìn)行定量,從而判斷細(xì)胞膜的受損情況。本期，將為大家講解有關(guān)細(xì)胞毒性的檢測產(chǎn)品、原理及特點(diǎn)等內(nèi)容。

細(xì)胞增殖及毒性檢測是生物相容性測試的一種，檢測藥物或者新型材料在生物環(huán)境中的毒性情況，即通過檢測材料或者藥物對細(xì)胞的增殖或者生長的影響，來評價(jià)藥物或材料的毒性或者活性，主要用于藥物活性篩選、細(xì)胞增殖測定、細(xì)胞毒性測定、抗**藥效測定等；常用MTT法或者CCK-8法檢測，另外也可以通過Live/dead雙染法進(jìn)行細(xì)胞成像，更直觀的記錄細(xì)胞的存活情況。

其局限性：① ELISA數(shù)據(jù)不能提供單個(gè)細(xì)胞產(chǎn)生因子的能力和頻率；②因受刺激細(xì)胞群的細(xì)胞因子產(chǎn)生是短暫的，并且不同細(xì)胞因子基因的表達(dá)動力學(xué)可以變化，故可能需要在幾個(gè)時(shí)間點(diǎn)收集測試樣品以更好地表征實(shí)驗(yàn)動物或培養(yǎng)細(xì)胞群的細(xì)胞因子產(chǎn)生。③在任何一個(gè)時(shí)間點(diǎn)測量的細(xì)胞因子蛋白濃度可能反映細(xì)胞因子分泌，細(xì)胞因子攝取的并發(fā)過程。通過細(xì)胞和細(xì)胞因子蛋白降解。由于這些過程，測量的細(xì)胞因子蛋白水平可能xian zhu低估細(xì)胞的實(shí)際細(xì)胞因子產(chǎn)生潛力。④試劑不統(tǒng)一，標(biāo)準(zhǔn)不統(tǒng)一，故定量不準(zhǔn)確等。為雜交瘤細(xì)胞生長期間和之后定性和定量抗體類別同種型提供了一種快速靈敏且簡便的方法，用于評估免疫應(yīng)答。

ELISA是一種基于酶的免疫測定方法，由于酶標(biāo)的放大作用，利用酶標(biāo)記抗體的免疫檢測，因其高特異性和敏感性而日益受到人們的青睞。細(xì)胞因子夾心ELISA是一種敏感的酶免疫分析方法，可以特異性地檢測和定量可溶性細(xì)胞因子和趨化因子蛋白的濃度。這一方法的基本原理是：①將已知抗體結(jié)合到某種固相載體表面；②加待測抗原，如兩者是特異的，則發(fā)生結(jié)合，然后把多余抗體洗除；③加入與待測抗原呈特異反應(yīng)的酶聯(lián)抗體，使形成“夾心”；④加入該酶的底物，若看到有色的酶解產(chǎn)物產(chǎn)生，說明在孔壁上存在相應(yīng)的抗原，利用酶標(biāo)儀測其OD值。有色產(chǎn)物的量與待測抗原的量直接相關(guān)，故可根據(jù)顏色反應(yīng)的深淺進(jìn)行定性或定量分析。FACS可以用于分離表達(dá)GFP的細(xì)胞和不表達(dá)GFP的細(xì)胞。外泌體檢測

幾乎不受環(huán)境pH影響。免疫熒光標(biāo)記

來自蛋白質(zhì)的生物熒光，如綠色熒光蛋白(GFP)可能已經(jīng)在水母等生物中存在了數(shù)百萬年。直到20世紀(jì)60年代，科學(xué)家才開始真正研究綠色熒光蛋白，并推斷出它的生化特性。現(xiàn)在，GFP及其熒光衍生物已成為實(shí)驗(yàn)室的主要研究對象。GFP被廣泛應(yīng)用于生物學(xué)科的研究，包括：標(biāo)記基因以闡明其表達(dá)或定位，作為生物傳感器或細(xì)胞標(biāo)記，研究蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用，可視化啟動子活性等等。

GFP是一種由238個(gè)氨基酸組成的大約27kda的蛋白，來源于水晶水母Aequorea victoria。它的熒光發(fā)射波長在可見光譜的綠色部分(因此得名)，這是由于蛋白中心的三個(gè)特定氨基酸(Ser65、Tyr66和Gly67)成熟反應(yīng)形成的發(fā)色團(tuán)。第yi次發(fā)現(xiàn)時(shí)，GFP*令人覺得不可思議的一點(diǎn)是發(fā)色團(tuán)自發(fā)形成，不需要額外的輔助因子、底物或酶活性——它只需要在成熟過程中存在氧氣。這意味著該蛋白可以直接從維多利亞藻中提取，并在任何生物體中表達(dá)，同時(shí)仍然保持熒光。 免疫熒光標(biāo)記

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1、原代細(xì)胞：ScienCell（中國區(qū)正規(guī)一級代理）人源和動物源各種原代細(xì)胞。

2、培養(yǎng)基：原代細(xì)胞**低血清、無血清、無異源蛋白無動物成分培養(yǎng)基。

3、細(xì)胞培養(yǎng)試劑：胎牛血清、原代細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑盒、細(xì)胞實(shí)驗(yàn)檢測試劑盒、細(xì)胞生長因子、ELISA試劑盒、定量PCR芯片試劑盒、DNA/RNA及細(xì)胞裂解物等。

4、細(xì)胞系（株）：種類豐富（1000余種），已通過STR鑒定；提供細(xì)胞株完全培養(yǎng)基。

5、自研產(chǎn)品：支原體檢測/qing除試劑盒、端粒酶檢測試劑盒、人源/動物源ELISA試劑盒等系列產(chǎn)品。

6、技術(shù)服務(wù)：綠/紅色熒光蛋白標(biāo)記、熒光素酶標(biāo)記、慢bing毒介導(dǎo)基因沉默或過表達(dá)及穩(wěn)轉(zhuǎn)株的構(gòu)建，細(xì)菌基因敲除、細(xì)胞基因敲除、小鼠基因敲除、血管生成功能學(xué)實(shí)驗(yàn)。