在大腸桿菌表達系統中,優化蛋白質的折疊和活性可以通過以下策略實現:1.優化表達載體:選擇具有強啟動子的表達載體,如T7啟動子,以實現高水平的蛋白表達。同時,載體中包含的SD序列位置和轉錄終止子也會影響轉錄和翻譯效率。2.密碼子優化:對目的基因進行密碼子改造,提高mRNA的穩定性和翻譯效率,特別是在大腸桿菌中表達真核基因時。3.融合蛋白及分子伴侶的使用:利用融合蛋白如GST、MBP等增加蛋白的可溶性表達,并共表達分子伴侶如GroEL/ES、DnaK/J/GrpE等,促進重組蛋白的翻譯后折疊加工。4.靶蛋白的定位表達:使用信號肽將重組蛋白分泌到細胞周質或胞外,周質空間的氧化環境有利于二硫鍵的形成和硫基蛋白的正確折疊。5.表達菌株的選擇:選擇適合目的蛋白特性的菌株,例如使用Rosetta2系列補充稀有密碼子對應的tRNA,或使用Origami2系列促進二硫鍵的形成。6.誘導條件的優化:包括誘導劑的選擇和濃度、溫度、培養時間和細胞密度等因素的調節。例如,在較低溫度下表達可能有助于提高蛋白的溶解性和表達水平。7.蛋白質的折疊和修飾:對于以包涵體形式表達的蛋白,進行重折疊和修飾,加入還原劑和折疊助劑促進正確的折疊。Phusion DNA Polymerase具有極高的保真性,其錯誤率比Taq DNA聚合酶低50倍以上,比Pfu DNA聚合酶低6倍。江蘇畢赤酵母表達VLP技術服務
支持IND(InvestigationalNewDrug,新藥臨床試驗申請)的GMP蛋白生產技術服務在臨床前研究中扮演著至關重要的角色。GMP,即GoodManufacturingPractice(良好生產規范),是一套適用于制藥等行業的強制性標準,確保產品質量符合相關標準,并能及時發現生產過程中存在的問題,加以改善。在臨床前研究階段,GMP蛋白生產服務通常包括以下幾個關鍵方面:1.多規模生產線:提供從50L到2000L不等規模的生產線,以適應不同階段的臨床前研究需求。2.細胞培養和蛋白純化:包括上游細胞培養、下游蛋白純化等GMP生產服務,確保生產過程的質量和效率。3.一次性生產設備:使用一次性袋子的生物反應器和液體存儲系統,降低清潔和維護成本,減少交叉污染風險。4.質量控制:進行工藝測試與控制,包括表達量、蛋白質濃度、滲透壓、細菌內毒的素、無菌等測試,以及放行測試,確保DS(原料藥)和DP(藥物產品)的質量。5.穩定性研究:進行長期穩定性、加速穩定性、強降解穩定性檢測和使用中穩定性研究,以確保蛋白產品的穩定性和可靠性。漢遜酵母表達人膠原蛋白技術服務臨床前研究DL50的清晰條帶能夠清晰地指示目標片段的位置,從而為實驗結果的解讀提供重要依據。
高靈敏度與特異性該試劑采用了優化的反應緩沖體系和抗體修飾的熱啟動TaqDNA聚合酶,能夠顯著提高擴增效率和特異性。即使在低拷貝數的模板條件下,也能實現穩定檢測,例如某些產品可在3copies/反應的水平下實現穩定檢出。此外,該試劑還通過添加抑制非特異性擴增的因子,進一步提升了多重反應的準確性。2.高效的多重檢測能力MultiplexProbeqPCRMix(2×,UDGPlus)支持在同一反應體系中進行多達四重的靶基因檢測。這種多重檢測能力極大地提高了實驗效率,減少了樣本用量和檢測時間,特別適用于需要同時檢測多個基因或病原體的場景。3.強大的防污染系統試劑中包含的dUTP/UDG系統能夠有效防止PCR產物的氣溶膠污染,從而避免假陽性結果的出現。UDG酶在室溫下即可發揮作用,確保實驗數據的準確性和可靠性。4.快速擴增與操作簡便該試劑支持快速擴增程序,可在短時間內完成qPCR反應,例如某些產品可在35分鐘內完成45個循環。同時,2×預混液的設計使得實驗操作更加簡便,只需加入模板、引物和探針即可進行反應。泛素連接酶E3識別特定的靶蛋白,并促進E2上的泛素轉移到靶蛋白的賴氨酸殘基上,形成泛素化標記。DL50plus
非變性上樣緩沖液是一種在進行DNA或RNA凝膠電泳時使用的試劑,主要用于保持核酸分子的天然結構,避免其在電泳過程中發生變性。以下是一些關于非變性上樣緩沖液的通用信息:1.主要成分:-甘油:增加樣品的密度,使其更容易沉入凝膠孔中。-溴酚藍:作為指示劑,顯示樣品的遷移情況。-二甲苯青:作為指示劑,顯示樣品的遷移情況。-其他成分:可能包括一些緩沖液成分,如MOPS(3-(N-嗎啉代)丙磺酸)等。2.用途:-適用于常規的雙鏈DNA、總RNA的電泳。-也可用于單鏈DNA、DNA引物、小RNA或分離純化的特定RNA的電泳。-特別適用于非變性的瓊脂糖凝膠電泳和聚丙烯酰胺凝膠(PAGE)電泳。3.使用說明:-通常按照9:1的比例將非變性上樣緩沖液與DNA或RNA樣品混合均勻。-混合后的樣品可以直接加入凝膠孔中進行電泳。4.保存條件:-一般建議在-20℃保存,可以延長有效期至2年。-短期使用時,可以存放在4℃,有效期至少一個月。5.注意事項:-避免RNase污染:操作過程中須嚴格注意避免RNase污染,特別是在處理RNA樣品時。-操作安全:使用時請戴口罩、防護手套及工作服,避免吸入或皮膚接觸。在多種實驗條件下,Hot-Start Taq Master Mix (2×) (Without Dye) 展現出了靈敏度和特異性。
Tris-磷酸電泳緩沖液(10×TPE,RNasefree):RNA電泳的可靠選擇在分子生物學實驗中,RNA的分離和分析是研究基因表達和調控關鍵環節。然而,RNA的穩定性較差,容易RNase降解,因此在RNA電泳實驗中,使用無RNase污染的緩沖液至關重要。Tris-磷酸電泳緩沖液(10×TPE,RNasefree)憑借其無RNase污染、高效分離和經濟實用的特點,成為RNA電泳的理想選擇。產品特點與優勢Tris-磷酸電泳緩沖液(10×TPE,RNasefree)的主要成分包括Tris(三羥甲基氨基甲烷)、磷酸和EDTA(乙二胺四乙酸)。這種配方能夠在電泳過程中提供穩定的pH環境,確保RNA的完整性。無RNase污染:經過特殊處理,確保無RNase污染,能夠有效保護RNA樣品免受降解。高效分離:TPE緩沖液具有較高的離子強度,適合分離小片段RNA,能夠提供清晰的電泳條帶。經濟實用:10×的高濃度設計使得該緩沖液在使用時可以根據實驗需求靈活稀釋,減少浪費,降低實驗成本。兼容性強:適用于多種類型的瓊脂糖凝膠電泳,兼容常見的核酸染料(如EB或GoldView),滿足不同實驗需求。使用方法使用Tris-磷酸電泳緩沖液(10×TPE,RNasefree)時,需按照以下步驟操作:稀釋緩沖液:根據實驗需求,取適量的10×TPE緩沖液,加入去離子水稀釋至1×工作液。100 mM dATP溶液以其高純度、濃度、強兼容性和性能,成為分子生物學研究中的重要工具。天津畢赤酵母表達VLP技術服務研發
Pfu Master Mix (2x)(With Dye)在定量PCR中的兼容性 預混染料可直接用于實時熒光定量PCR,無需額外添加染料。江蘇畢赤酵母表達VLP技術服務
DL15000 DNA Marker:大片段DNA分析的理想工具DL15000 DNA Marker 是一種即用型的DNA分子量標準,廣應用于瓊脂糖凝膠電泳中,用于分析和估算DNA片段的大小。它由7條線狀雙鏈DNA片段組成,覆蓋從250 bp到15000 bp的范圍,能夠為大片段DNA的分析提供精確的參考。產品特點組成:DL15000 DNA Marker 包含7條DNA片段,分別為250 bp、1000 bp、2500 bp、5000 bp、7500 bp、10000 bp和15000 bp。即用型設計:已預混1×Loading Buffer,可直接上樣,無需額外處理。清晰的條帶:電泳圖像清晰,背景干凈,條帶亮度均勻。穩定性高:在-20℃下可長期保存,室溫下也能穩定保存6個月。使用方法上樣量:建議每次取5 μL直接加入瓊脂糖凝膠的加樣孔中。如果加樣孔較寬,可適當增加上樣量。電泳條件:推薦使用1%的瓊脂糖凝膠,電壓5 V/cm左右,電泳時間35-40分鐘。染色與觀察:電泳結束后,使用溴化乙錠(EB)或其他DNA染料染色,在紫外燈下觀察。注意事項保存條件:建議低溫保存,避免反復凍融。瓊脂糖質量:電泳時應盡量選用高質量的瓊脂糖,以獲得比較好分離效果。電泳緩沖液:及時更換電泳緩沖液并使用新制備的凝膠,以免影響電泳結果。江蘇畢赤酵母表達VLP技術服務